Первым достоверным фактом его биографии является сообщение о том, что в 1529 году он был поставлен из старцев в игумены Троицкого монастыря.
В 1530 был восприемником от купели сына Василия III — будущего царя Иоанна IV.
6 февраля 1539 года избран на Московскую первосвятительскую кафедру; участвовал в ожесточённой политической борьбе в период малолетства Иоанна IV.
В 1540 ходатайствовал перед государем об освобождении князя Ивана Фёдоровича Бельского из темницы. С тех пор, вместе с Бельским, был «первосоветником» государя. Недовольные этим Шуйские 3 января 1542 низложили его и сослали на Белоозеро в Кириллов монастырь. Позже он был переведён в Троицкий монастырь, где и скончался.
Иоасафу приписывают составление жития архиепископа Новгородского Серапиона и освобождение из темницы преподобного Максима Грека.
Погребён в Троицком соборе Троицкого-Сергиева монастыря; мощи покоятся под спудом.
Преемником Иоасафа на митрополичьем престоле стал Макарий.