Родилась в Лиссабоне 24 октября 1503 года. Дочь короля Португалии Мануэла I и его второй жены Марии Арагонской. 1 ноября 1525 г. в Севилье она вышла замуж за своего кузена Карла V. Была регентом Испании в 1528—1533 и 1535—1538 гг.
Умерла 1 мая 1539 года в Толедо после рождения пятого ребёнка от гриппа или пневмонии.