В 1530 г. Амбергер был принят в цех художников Аугсбурга, где он и трудился вплоть до своей смерти, специализируясь в основном на портретах. Амбергер изучал живопись у Л. Бека в Аугсбурге. Амбергер считается выдающимся художником поколения, следующего за Дюрером и Бургкмайром. В 1530 г. Амбергер получил звание мастера, необходимое в Средние века для того, чтобы стать гражданином Аугсбурга и пользоваться всеми гражданскими правами. Сохранился целый ряд портретов его известных и уважаемых современников. Так Амбергер написал многочисленные портреты патрициев Аугсбурга и их жён, а также портреты Карла V, заложившие основу успеха художника, а также портреты Георга фон Фрундсберга, Конрада Пейтингера, Фуггеров и Вельзеров, а также известный портрет космографа Себастиана Мюнстера. В 1548 г. Амбергер познакомился с Тицианом. Самым значительным произведением Амбергера считается панель главного алтаря аугсбургского кафедрального собора, созданный в 1554 г. после того, как был уничтожен алтарь работы Ганса Гольбейна Старшего. Помимо этого сохранилось около 30 рисунков Амбергера.
Портрет космографа Себастиана Мюнстера. Ок. 1545. Картинная галерея. Берлин
Портрет Карла V. Ок. 1532. Картинная галерея. Берлин
Мужской портрет. Ок. 1545. Эрмитаж. Санкт-Петербург
Женский портрет. Ок. 1545. Эрмитаж. Санкт-Петербург
Портрет Христофа Фуггера. Ок. 1541. Старая пинакотека. Мюнхен