Джон Лассетер родился в Голливуде, штат Калифорния. Мать Джона работала учителем рисования в средней школе «Bell Gardens». Его отец — Пол Лассетер был менеджером дилера Chevrolet. Рос Джон в городе Уиттер, штат Калифорния. Профессия матери Ласстера повлияла на его привязанность и интерес к анимации и мультипликации. Он часто любил рисовать во время церковных служб в храме Христа, в которых участвовала его семья. Будучи ребенком, Лассетер устраивал гонку домой из школы, чтобы посмотреть мультфильмы Чака Джонса. В это время в школе он читал книгу о Спящей Красавице, называемой Искусством Анимации. Прочитанная книга Боба Томаса заставила понять Джона, что он хочет сам делать анимацию. Когда он увидел экранизацию Уолта Диснея по произведению Т. Х. Уайта — «Меч в камне» он окончательно решил стать художником-мультипликатором.
Его образование началось в Пеппердинском Университете. В это университете также учились родители Ласстера, его братья и сестры. Однако, он услышал о новой программе обучения в Калифорнийском Институте Изобразительных Искусств и решил уйти из Пеппердин, чтобы осуществить свою мечту. Мать Джона тоже хотела, чтобы его карьера была связана с анимацией, в 1975 году он стал вторым студентом, пуступившим в Калифорнийский Институт Изобразительного Искусства. Преподавателями Лассетера были три сотрудника Диснея — Эрик Ларсон, Фрэнк Томас и Олли Джонстон, а его одноклассниками стали Брэд Берд, Джон Машкер, Генри Селик и Тим Бертон. Во время его пребывания там, он спродюсировал две короткометражки Леди и Лампа (1979) и Nitemare (1980), в котором студент выиграл Академии Наград для Анимации. 1 ноября 2011 года заложена его именная звезда на Голливудской «Аллее Славы», которая стала 2453-й на ней.