Джон Гленн родился 18 июля 1921 г. в американском городе Кембридж, Огайо. Окончил начальную и среднюю школу в Нью-Конкорде (en) (Огайо), затем Маскинум-Колледж; получил степень бакалавра. С 1942 года Джон Гленн прошёл обучение по программе лётчика морской авиации и в 1943 году был принят на воинскую службу в ряды морской пехоты. Во время Второй мировой войны Джон Гленн сделал 59 боевых вылетов, летал на F4U «Корсар» над Маршалловыми островами. После Второй мировой войны продолжал служить лётчиком на острове Гуам. Он участвовал в Корейской войне, отслужив на театре военных действий два срока: первый — летая в составе эскадрильи морской пехоты на F9F «Пантера», второй — в составе ВВС США по программе обмена на F-86 «Сейбр» (на «Сейбре» он одержал три воздушные победы).
После Корейской войны Джон Гленн окончил школу лётчиков-испытателей. С 1956 по 1959 годы — служба лётчиком-испытателем. В это же время Джон Гленн окончил Университет Мэриленда.
В июле 1957 года Джон Гленн установил рекорд скорости трансконтинентального перелёта. Он пролетел на истребителе F8U из Лос-Анджелеса до Нью-Йорка за 3 часа и 23 минуты.
В 2009 году награжден высшей наградой США — Золотой медалью Конгресса.
В апреле 1959 года Джон Гленн был зачислен в первую группу американских астронавтов, так называемую «первую семёрку», которые начали подготовку к космическим полётам по программе «Меркурий».
Джон Гленн был дублёром Алана Шепарда, который 5 мая 1961 году осуществил суборбитальный космический полёт, и Вирджила Гриссома, который также осуществил суборбитальный космический полёт 21 июля 1961 года.
Джон Гленн — первый американский астронавт, совершивший орбитальный космический полёт. 20 февраля 1962 года Гленн на «Меркурии-6» три раза облетел земной шар. Продолжительность полёта составила 4 часа 55 мин. После удачного приводнения Джон Гленн стал национальным героем США (был награждён медалью НАСА «За выдающиеся заслуги»).
Второй полёт Джон Гленн совершил в качестве специалиста по полезной нагрузке на космическом корабле «Дискавери» (STS-95) 29 октября — 7 ноября 1998 года. Миссия «Дискавери» продолжалась 213 часов 44 мин. Ко времени второго космического полёта Джону Гленну исполнилось 77 лет. В настоящее время он является самым пожилым человеком, совершившим орбитальный космический полёт.
В 1964 году Джон Гленн покинул отряд астронавтов и с 1965 по 1974 годы занимался бизнесом. В ноябре 1974 года Джон Гленн был выбран в Сенат США от штата Огайо и оставался сенатором до января 1999 года. В 1983 году Джон Гленн был выдвинут кандидатом в Президенты США (выборы 1984 года).